원뿔형 원심분리 튜브를 사용하기 전에 튜브가 원심분리 중에 필요한 압력을 견딜 수 있는지 확인해야 합니다. 혼동을 방지하려면 충전 수준을 확인하고 사용 중에 캡이 빠지지 않도록 하는 것이 중요합니다.
세포 배양 응용 분야에는 멸균 원뿔형 원심분리 튜브가 사용됩니다. 이 유형의 튜브는 고강도 제조 공정을 갖추고 있으며 더 큰 온도 안정성을 제공하도록 설계되었습니다. 원뿔형 원심분리 튜브를 준비하려면 아래 설명된 단계를 따르십시오.
각 멸균 원추형 원심분리기 튜브에 정확한 부피의 밀도 구배 매체를 추가합니다. 밀도 구배 매체는 Hanks의 HBSS(Balanced Salt Solution) 및 PBS를 포함한 다양한 매체에서 사용할 수 있습니다. 둘 다 식염수 용액이며 칼슘이나 마그네슘이 포함되어 있지 않습니다. 그러나 HBSS는 PBS보다 산성도가 낮기 때문에 적합합니다.
다음으로 혈액과 초기 분리 매체를 WDR로 희석합니다. 희석 후 샘플을 멸균 원뿔형 원심분리 튜브로 옮깁니다. 혈액이 희석되지 않으면 혈장이 밀도 구배층 아래에 나타나 분리가 어려울 수 있습니다. 또는 전체 혈장이 희석되면 PBMC가 혈장에서 분리될 수 있습니다.
마지막으로 버피 코트와 파지 밴드를 하나의 50mL 원추형 원심분리기 튜브에 풀입니다. 튜브에 PTID와 기술자의 이니셜을 붙입니다. 샘플을 다시 원심분리한 후 파지 밴드를 제거하고 상등액을 폐기합니다.
샘플의 무결성을 유지하려면 Underlay Method와 같은 시약에 대한 프로토콜을 따르는 것이 좋습니다. 이 방법은 두 층 사이의 중력을 기반으로 하며 집합체를 생성합니다. 수동 오버레이와 같은 다른 방법도 사용할 수 있습니다.
혼합 가능성을 최소화하려면 밀도 구배 매체 위에 초기 혈액 튜브를 피펫팅하는 것이 좋습니다. 혈액과 밀도 구배 배지 용액을 천천히 부드럽게 피펫팅해야 합니다.
원뿔형 원심분리 튜브가 시료의 압력을 감당할 수 없는 경우 재원심분리 튜브를 사용할 수 있습니다. 재원심분리 튜브가 멸균되어 있고 압력을 견딜 수 있는지 확인하십시오. 사용 사이에 재원심분리 튜브를 상온으로 유지하기 위한 것입니다. 또는 재원심분리 튜브를 저온에 보관할 수도 있습니다. 동결-해동 주기 동안 재원심분리기의 온도는 2~8degC여야 합니다.
혈액이 희석되면 WDR을 추가하여 혈액량을 늘릴 수 있습니다. 희석액을 멸균 원뿔형 원심분리 튜브에 분취할 수도 있습니다. 혈액 10mL마다 WDR 0.1mL를 추가합니다.
또한, 수령한 모든 혈액 튜브에 PTID를 기록해야 합니다. PTID 식별자를 사용하면 교차 오염을 최소화하는 데 도움이 됩니다. 또한 혼동을 피하기 위해 각 PTID를 서로 다른 색상 마커로 표시할 수 있습니다.
원심분리기 튜브 변형 번호 | 모델 | RCF | 살균 | 맨 아래 | 패키지 사양 |
3030001 | 15ml | 12000xg | 예 | 콘 바닥 | 50/가방,10가방/케이스 |
3030002 | 15ml | 12000xg | 예 | 콘 바닥 | 50/폼 랙, 10랙/케이스 |
3031001 | 50ml | 12000xg | 예 | 콘 바닥 | 25/가방,20가방/케이스 |
3031002 | 50ml | 12000xg | 예 | 콘 바닥 | 25/폼 랙,20랙/케이스 |