원추 원심 분리 튜브를 사용하기 전에 튜브가 원심 분리 중에 필요한 압력을 견딜 수 있는지 확인해야합니다. 믹스 업을 방지하려면 충전 레벨을 식별하고 사용 중 캡을 제거하지 않도록하는 것이 중요합니다.
세포 배양 응용의 경우, 멸균 원추형 원심 분리기 튜브가 사용된다. 이 유형의 튜브는 강도가 높은 제조 공정을 가지며 온도 안정성을 높이도록 설계되었습니다. 원추 원심 분리 튜브를 준비하려면 아래에 요약 된 단계를 따르십시오.
각 멸균 원추형 원심 분리 튜브에 올바른 양의 밀도 구배 배지를 추가하십시오. 밀도 그라디언트 매체는 행크스의 균형 소금 솔루션 (HBSS) 및 PBS를 포함한 다양한 매체에서 제공됩니다. 둘 다 식염수 용액이며 칼슘이나 마그네슘이 포함되어 있지 않습니다. 그러나 HBSS는 PBS보다 산성이 적기 때문에 적합합니다.
다음으로, 혈액과 초기 분리 매질을 WDR로 희석시킵니다. 희석 후, 샘플을 멸균 원추골 원심 분리 튜브로 옮깁니다. 혈액이 희석되지 않으면 혈장은 밀도 구배 층 아래에 나타나고 분리하기가 어려울 수 있습니다. 대안 적으로, 전체 혈장이 희석되면, PBMC는 혈장으로부터 분리 될 수있다.
마지막으로, 버피 코트와 파지 밴드를 하나의 50 ml 원심 분리 튜브에 모으십시오. PTID 및 기술자의 이니셜에 튜브에 라벨을 붙입니다. 샘플이 다시 중심되면, 파지 밴드를 제거하고 상청액을 폐기하십시오.
샘플의 무결성을 유지하려면 언더레이 방법과 같은 시약 프로토콜을 따르는 것이 좋습니다. 이 방법은 두 층 사이의 중력을 기반으로하며 집계를 생성합니다. 수동 오버레이와 같은 다른 방법도 사용할 수 있습니다.
혼합 가능성을 최소화하려면 밀도 구배 매체 위에 초기 혈관을 피펫 팅하는 것이 좋습니다. 혈액과 밀도 구배 매체 용액은 천천히 부드럽게 피펫 팅해야합니다.
원추 원심 분리기 튜브가 샘플의 압력을 처리 할 수 없으면 재 중심 튜브를 사용할 수 있습니다. 재 중심 튜브가 멸균되어 압력을 견딜 수 있는지 확인하십시오. 그것은 용도 사이의 실온에서 재 중심 튜브를 유지하는 것입니다. 대안 적으로, 재 중심 튜브는 저온에서 저장 될 수있다. 동결-해동주기 동안, 재 중심은 2 내지 8DEGC 여야한다.
혈액이 희석되면 WDR을 추가하여 양을 늘릴 수 있습니다. 또한 멸균 원추형 원심 분리기 튜브에 희석을 분취 할 수 있습니다. 혈액 10ml마다 0.1 ml의 WDR을 첨가하십시오.
또한,받은 모든 혈액 튜브에 PTID가 주목되어야합니다. PTID 식별자를 사용하면 교차 오염을 최소화하는 데 도움이됩니다. 또한 혼란을 피하기 위해 각 PTID를 다른 색 마커로 표시 할 수 있습니다.
원심 분리 튜브 변형 번호 | 모델 | RCF | 멸균 | 맨 아래 | 패키지 사양 |
3030001 | 15ml | 12000xG | 예 | 원뿔 바닥 | 50/백, 10 백/케이스 |
3030002 | 15ml | 12000xG | 예 | 원뿔 바닥 | 50/폼 랙, 10 racks/case |
3031001 | 50ml | 12000xG | 예 | 원뿔 바닥 | 25/백, 20 백/케이스 |
3031002 | 50ml | 12000xG | 예 | 원뿔 바닥 | 25/폼 랙, 20Racks/Case |